Técnica de PCR - Polymerase Chain Reaction

Definição: É uma técnica utilizada em Biologia Molecular que permite a "amplificação" ou multiplicação exponencial de segmentos de DNA, facilitando sua análise, posteriormente realizada através de géis de agarose ou poliacrilamida ou de sistemas automatizados que geram sinais gráficos. Os segmentos que estão sendo estudados são flanqueados através de outros segmentos menores que iniciam a reação e são chamados de iniciadores ou "primers".

Equipamento usado na técnica de PCR

Primeira Etapa:

As duplas fitas de DNA que estão unidas através de fracas ligações chamadas pontes de hidrogênio, são separadas por um aumento da temperatura.

 

Segunda Etapa:

Os primers se anelizam à regiões homólogas do DNA da fita mãe.

Se não houver regiões homólogas, eles não se anelizarão e não ocorrerá a formação de uma nova fita.

Portanto, não haverá amplificação de DNA, não ocorrendo o aparecimento da banda correspondente em gel de agarose e poliacrilamida ou do sinal gráfico no eletroferograma em sistemas automatizados.

 

Terceira Etapa:

Uma enzima termoestável chamada Taq DNA Polymerase age fixando os nucleotídeos na fita complementar que vai ser formada a partir da fita molde.

Desta maneira, no primeiro ciclo irão se formar quatro fitas a partir das duas primeiras; no segundo ciclo irão se formar oito fitas, e assim por diante. Ao final de trinta e seis ciclos, teremos uma quantidade de fitas de DNA da ordem de 2 ou 137.438.973.472 de fitas a partir das duas primeiras.

Amplificação do DNA mediante o PCR

Figura explicativa da visualização das bandas do DNA do HPV em gel de Agarose.

Gel de agarose de dois casos negativo e positivo de MY09/11	Gel de agarose de dois casos negativo e positivo de GP5/GP6+	Gel de agarose de RFLP